Terima kasih kerana melawat Nature.com. Versi penyemak imbas yang anda gunakan mempunyai sokongan CSS terhad. Untuk hasil terbaik, kami mengesyorkan menggunakan penyemak imbas yang lebih baru (atau melumpuhkan mod keserasian di Internet Explorer). Sementara itu, untuk memastikan sokongan yang berterusan, kami akan memaparkan tapak tanpa gaya dan JavaScript.
Penubuhan model haiwan perubahan modik (MC) adalah asas penting untuk mengkaji MC. Lima puluh empat arnab putih New Zealand dibahagikan kepada kumpulan operasi sham, kumpulan implantasi otot (kumpulan ME) dan kumpulan implantasi nukleus pulposus (kumpulan NPE). Dalam kumpulan NPE, cakera intervertebral didedahkan oleh pendekatan pembedahan lumbar anterolateral dan jarum digunakan untuk menusuk badan vertebral L5 berhampiran plat akhir. NP diekstrak dari cakera intervertebral L1/2 oleh picagari dan disuntik ke dalamnya. Penggerudian lubang di tulang subkondral. Prosedur pembedahan dan kaedah penggerudian dalam kumpulan implantasi otot dan kumpulan operasi sham adalah sama seperti yang ada dalam kumpulan implantasi NP. Dalam kumpulan ME, sekeping otot diletakkan ke dalam lubang, sementara dalam kumpulan operasi sham, tiada apa yang dimasukkan ke dalam lubang. Selepas operasi, pengimbasan MRI dan ujian biologi molekul dilakukan. Isyarat dalam kumpulan NPE berubah, tetapi tidak ada perubahan isyarat yang jelas dalam kumpulan operasi sham dan kumpulan ME. Pemerhatian histologi menunjukkan bahawa percambahan tisu yang tidak normal diperhatikan di tapak implantasi, dan ekspresi IL-4, IL-17 dan IFN-γ meningkat dalam kumpulan NPE. Implantasi NP ke dalam tulang subkondral boleh membentuk model haiwan MC.
Perubahan modik (MC) adalah lesi endplate vertebra dan sumsum tulang bersebelahan yang dapat dilihat pada pengimejan resonans magnetik (MRI). Mereka agak biasa pada individu dengan gejala yang berkaitan1. Banyak kajian telah menekankan pentingnya MC kerana persatuan dengan sakit belakang rendah (LBP) 2,3. De Roos et al.4 dan Modic et al.5 Secara bebas pertama kali menggambarkan tiga jenis keabnormalan isyarat subkondral dalam sumsum tulang vertebra. Perubahan jenis Modik adalah hypointense pada urutan T1 (T1W) dan hyperintense pada urutan T2 (T2W). Lesi ini mendedahkan endplate fissure dan tisu granulasi vaskular bersebelahan dalam sumsum tulang. Perubahan jenis Modic II menunjukkan isyarat tinggi pada kedua -dua urutan T1W dan T2W. Dalam jenis lesi ini, kemusnahan endplate dapat dijumpai, serta penggantian lemak histologi sumsum tulang bersebelahan. Perubahan jenis Modic III menunjukkan isyarat rendah dalam urutan T1W dan T2W. Lesi sclerotik yang sepadan dengan endplates telah diperhatikan6. MC dianggap sebagai penyakit patologi tulang belakang dan dikaitkan rapat dengan banyak penyakit degeneratif tulang belakang 7,8,9.
Memandangkan data yang ada, beberapa kajian telah memberikan gambaran terperinci ke dalam etiologi dan mekanisme patologi MC. Albert et al. mencadangkan bahawa MC mungkin disebabkan oleh cakera herniasi8. Hu et al. dikaitkan MC kepada degenerasi cakera yang teruk10. Kroc mencadangkan konsep "pecah cakera dalaman," yang menyatakan bahawa trauma cakera berulang boleh menyebabkan microtears di endplate. Selepas pembentukan celah, kemusnahan endplate oleh nukleus pulposus (NP) boleh mencetuskan tindak balas autoimun, yang seterusnya membawa kepada pembangunan MC11. Ma et al. berkongsi pandangan yang sama dan melaporkan bahawa autoimmunity yang disebabkan oleh NP memainkan peranan penting dalam patogenesis MC12.
Sel -sel sistem imun, terutamanya limfosit penolong CD4+ T, memainkan peranan penting dalam patogenesis autoimmunity13. Subset Th17 yang baru ditemui menghasilkan sitokin proinflamasi IL-17, menggalakkan ekspresi chemokine, dan merangsang sel T dalam organ yang rosak untuk menghasilkan IFN-γ14. Sel Th2 juga memainkan peranan yang unik dalam patogenesis tindak balas imun. Ekspresi IL-4 sebagai sel Th2 wakil boleh membawa kepada akibat imunopatologi yang teruk15.
Walaupun banyak kajian klinikal telah dijalankan pada MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, masih terdapat kekurangan model eksperimen haiwan yang sesuai yang dapat meniru proses MC yang sering terjadi pada manusia dan dapat Digunakan untuk menyiasat etiologi atau rawatan baru seperti terapi yang disasarkan. Sehingga kini, hanya beberapa model haiwan MC telah dilaporkan untuk mengkaji mekanisme patologi yang mendasari.
Berdasarkan teori autoimun yang dicadangkan oleh Albert dan MA, kajian ini menubuhkan model MC arnab yang mudah dan boleh dihasilkan dengan autotransplanting NP berhampiran plat akhir vertebral yang digerudi. Objektif lain adalah untuk melihat ciri -ciri histologi model haiwan dan menilai mekanisme khusus NP dalam pembangunan MC. Untuk tujuan ini, kami menggunakan teknik seperti biologi molekul, MRI, dan kajian histologi untuk mengkaji perkembangan MC.
Dua arnab mati akibat pendarahan semasa pembedahan, dan empat arnab meninggal semasa anestesia semasa MRI. Baki 48 arnab terselamat dan tidak menunjukkan tanda -tanda tingkah laku atau neurologi selepas pembedahan.
MRI menunjukkan bahawa intensiti isyarat tisu tertanam dalam lubang yang berbeza adalah berbeza. Keamatan isyarat badan vertebra L5 dalam kumpulan NPE secara beransur -ansur berubah pada 12, 16 dan 20 minggu selepas sisipan (urutan T1W menunjukkan isyarat rendah, dan urutan T2W menunjukkan isyarat campuran ditambah isyarat rendah) (Rajah 1C), manakala penampilan MRI Daripada dua kumpulan lain bahagian tertanam kekal stabil dalam tempoh yang sama (Rajah 1A, B).
(A) MRI berurutan perwakilan tulang belakang lumbar arnab pada 3 titik masa. Tiada keabnormalan isyarat yang terdapat dalam imej kumpulan operasi sham. (B) Ciri-ciri isyarat badan vertebra dalam kumpulan ME adalah serupa dengan kumpulan operasi sham, dan tiada perubahan isyarat yang signifikan diperhatikan di tapak embedding dari masa ke masa. (C) Dalam kumpulan NPE, isyarat rendah jelas kelihatan dalam urutan T1W, dan isyarat campuran dan isyarat rendah dapat dilihat dengan jelas dalam urutan T2W. Dari tempoh 12 minggu hingga tempoh 20 minggu, isyarat tinggi sporadis yang mengelilingi isyarat rendah dalam pengurangan urutan T2W.
Hiperplasia tulang yang jelas dapat dilihat di tapak implantasi badan vertebra dalam kumpulan NPE, dan hiperplasia tulang berlaku lebih cepat dari 12 hingga 20 minggu (Rajah 2C) berbanding dengan kumpulan NPE, tiada perubahan ketara diperhatikan dalam vertebral yang dimodelkan badan; Kumpulan Sham dan Kumpulan ME (Rajah 2C) 2a, b).
(A) Permukaan badan vertebra di bahagian yang ditanam sangat licin, lubang sembuh dengan baik, dan tidak ada hiperplasia dalam badan vertebra. (B) Bentuk tapak yang ditanam dalam kumpulan ME adalah serupa dengan kumpulan operasi palsu, dan tidak ada perubahan yang jelas dalam penampilan tapak yang diimplan dari masa ke masa. (C) Hiperplasia tulang berlaku di tapak yang ditanam dalam kumpulan NPE. Hiperplasia tulang meningkat dengan pesat dan bahkan dilanjutkan melalui cakera intervertebral ke badan vertebra contralateral.
Analisis histologi memberikan maklumat yang lebih terperinci mengenai pembentukan tulang. Rajah 3 menunjukkan gambar -gambar bahagian pasca operasi yang diwarnai dengan H & E. Dalam kumpulan operasi sham, chondrocytes telah diatur dengan baik dan tiada percambahan sel dikesan (Rajah 3A). Keadaan dalam kumpulan ME adalah serupa dengan kumpulan operasi sham (Rajah 3B). Walau bagaimanapun, dalam kumpulan NPE, sejumlah besar chondrocytes dan percambahan sel-sel seperti NP diperhatikan di tapak implantasi (Rajah 3C);
(A) Trabeculae dapat dilihat di dekat plat akhir, kondroit diatur dengan saiz dan bentuk sel seragam dan tiada percambahan (40 kali). (B) Keadaan tapak implantasi dalam kumpulan ME adalah serupa dengan kumpulan sham. Trabeculae dan chondrocytes dapat dilihat, tetapi tidak ada percambahan yang jelas di tapak implantasi (40 kali). (B) Dapat dilihat bahawa kondroit dan sel-sel seperti NP berkembang dengan ketara, dan bentuk dan saiz kondroit tidak sekata (40 kali).
Ekspresi mRNA interleukin 4 (IL-4), mRNA interleukin 17 (IL-17), dan interferon γ (IFN-γ) mRNA diperhatikan dalam kedua-dua kumpulan NPE dan ME. Apabila tahap ekspresi gen sasaran dibandingkan, ekspresi gen IL-4, IL-17, dan IFN-γ meningkat dengan ketara dalam kumpulan NPE berbanding dengan kumpulan ME dan kumpulan operasi Sham (Rajah 4) (P <0.05). Berbanding dengan kumpulan operasi Sham, tahap ekspresi IL-4, IL-17, dan IFN-γ dalam kumpulan ME hanya meningkat sedikit dan tidak mencapai perubahan statistik (p> 0.05).
Ekspresi mRNA IL-4, IL-17 dan IFN-γ dalam kumpulan NPE menunjukkan trend yang jauh lebih tinggi daripada kumpulan operasi Sham dan kumpulan ME (p <0.05).
Sebaliknya, tahap ekspresi dalam kumpulan ME tidak menunjukkan perbezaan yang signifikan (p> 0.05).
Analisis blot Barat dilakukan menggunakan antibodi yang tersedia secara komersil terhadap IL-4 dan IL-17 untuk mengesahkan corak ekspresi mRNA yang diubah. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5A, B, berbanding dengan kumpulan ME dan kumpulan operasi Sham, tahap protein IL-4 dan IL-17 dalam kumpulan NPE meningkat dengan ketara (P <0.05). Berbanding dengan kumpulan operasi Sham, tahap protein IL-4 dan IL-17 dalam kumpulan ME juga gagal mencapai perubahan ketara secara statistik (p> 0.05).
(A) Tahap protein IL-4 dan IL-17 dalam kumpulan NPE jauh lebih tinggi daripada kumpulan ME dan kumpulan plasebo (p <0.05). (B) Histogram Blot Barat.
Oleh kerana jumlah sampel manusia yang diperoleh semasa pembedahan, kajian yang jelas dan terperinci mengenai patogenesis MC agak sukar. Kami cuba menubuhkan model haiwan MC untuk mengkaji mekanisme patologi yang berpotensi. Pada masa yang sama, penilaian radiologi, penilaian histologi dan penilaian biologi molekul digunakan untuk mengikuti kursus MC yang disebabkan oleh autograft NP. Akibatnya, model implantasi NP menghasilkan perubahan secara beransur-ansur dalam intensiti isyarat dari titik 12 minggu hingga 20 minggu (isyarat rendah campuran dalam urutan T1W dan isyarat rendah dalam urutan T2W), menunjukkan perubahan tisu, dan histologi dan molekul Penilaian biologi mengesahkan hasil kajian radiologi.
Hasil eksperimen ini menunjukkan bahawa perubahan visual dan histologi berlaku di tapak pelanggaran badan vertebra dalam kumpulan NPE. Pada masa yang sama, ungkapan gen IL-4, IL-17 dan IFN-γ, serta IL-4, IL-17 dan IFN-γ diperhatikan, menunjukkan bahawa pelanggaran tisu pulposus nukleus autologous di vertebral dalam vertebral Badan boleh menyebabkan satu siri isyarat dan perubahan morfologi. Sangat mudah untuk mengetahui bahawa ciri -ciri isyarat badan vertebra model haiwan (isyarat rendah dalam urutan T1W, isyarat campuran dan isyarat rendah dalam urutan T2W) sangat mirip dengan sel -sel vertebra manusia, dan ciri -ciri MRI juga Sahkan pemerhatian histologi dan anatomi kasar, iaitu, perubahan dalam sel -sel badan vertebra adalah progresif. Walaupun tindak balas keradangan yang disebabkan oleh trauma akut mungkin muncul tidak lama selepas tusukan, keputusan MRI menunjukkan bahawa perubahan isyarat yang semakin meningkat muncul 12 minggu selepas tusukan dan berterusan sehingga 20 minggu tanpa sebarang tanda pemulihan atau pembalikan perubahan MRI. Keputusan ini menunjukkan bahawa NP vertebral autologous adalah kaedah yang boleh dipercayai untuk mewujudkan MV progresif dalam arnab.
Model tusukan ini memerlukan kemahiran, masa, dan pembedahan yang mencukupi. Dalam eksperimen awal, pembedahan atau rangsangan berlebihan struktur ligamen paravertebral boleh mengakibatkan pembentukan osteophytes vertebra. Penjagaan harus diambil untuk tidak merosakkan atau merengsakan cakera bersebelahan. Oleh kerana kedalaman penembusan mesti dikawal untuk mendapatkan hasil yang konsisten dan boleh dihasilkan, kami secara manual membuat palam dengan memotong sarung jarum panjang 3 mm. Menggunakan palam ini memastikan kedalaman penggerudian seragam dalam badan vertebra. Dalam eksperimen awal, tiga pakar bedah ortopedik yang terlibat dalam operasi mendapati jarum 16-gauge lebih mudah untuk bekerja dengan jarum 18-gauge atau kaedah lain. Untuk mengelakkan pendarahan yang berlebihan semasa penggerudian, memegang jarum masih untuk seketika akan memberikan lubang penyisipan yang lebih sesuai, menunjukkan bahawa tahap MC tertentu dapat dikawal dengan cara ini.
Walaupun banyak kajian telah mensasarkan MC, sedikit diketahui tentang etiologi dan patogenesis MC25,26,27. Berdasarkan kajian terdahulu kami, kami mendapati bahawa autoimmunity memainkan peranan penting dalam kejadian dan perkembangan MC12. Kajian ini mengkaji ungkapan kuantitatif IL-4, IL-17, dan IFN-γ, yang merupakan laluan pembezaan utama CD4+ sel selepas rangsangan antigen. Dalam kajian kami, berbanding dengan kumpulan negatif, kumpulan NPE mempunyai ekspresi yang lebih tinggi daripada IL-4, IL-17, dan IFN-γ, dan tahap protein IL-4 dan IL-17 juga lebih tinggi.
Secara klinikal, ekspresi mRNA IL-17 meningkat dalam sel NP dari pesakit dengan herniasi cakera28. Peningkatan tahap ekspresi IL-4 dan IFN-γ juga didapati dalam model herniasi cakera yang tidak kompresif akut berbanding dengan kawalan sihat29. IL-17 memainkan peranan penting dalam keradangan, kecederaan tisu dalam penyakit autoimun30 dan meningkatkan tindak balas imun kepada IFN-γ31. Kecederaan tisu IL-17 yang dipertingkatkan telah dilaporkan dalam MRL/LPR MICE32 dan tikus autoimmunity-susceptible. IL-4 boleh menghalang ekspresi sitokin proinflamasi (seperti IL-1β dan TNFα) dan pengaktifan makrofag34. Dilaporkan bahawa ekspresi mRNA IL-4 adalah berbeza dalam kumpulan NPE berbanding dengan IL-17 dan IFN-γ pada masa yang sama; Ekspresi mRNA IFN-γ dalam kumpulan NPE jauh lebih tinggi daripada itu dalam kumpulan lain. Oleh itu, pengeluaran IFN-γ mungkin merupakan pengantara tindak balas keradangan yang disebabkan oleh interkalasi NP. Kajian telah menunjukkan bahawa IFN-γ dihasilkan oleh pelbagai jenis sel, termasuk sel T jenis 1 yang diaktifkan, sel pembunuh semulajadi, dan makrofages35,36, dan merupakan sitokin pro-inflamasi utama yang menggalakkan tindak balas imun37.
Kajian ini menunjukkan bahawa tindak balas autoimun mungkin terlibat dalam kejadian dan perkembangan MC. Luoma et al. mendapati bahawa ciri -ciri isyarat MC dan NP terkemuka adalah sama pada MRI, dan kedua -duanya menunjukkan isyarat tinggi dalam urutan T2W38. Sesetengah sitokin telah disahkan berkait rapat dengan kejadian MC, seperti IL-139. Ma et al. mencadangkan bahawa penonjolan ke atas atau ke bawah NP mungkin mempunyai pengaruh yang besar terhadap kejadian dan perkembangan MC12. Bobechko40 dan Herzbein et al.41 melaporkan bahawa NP adalah tisu immunotolerant yang tidak dapat memasuki peredaran vaskular sejak lahir. Protrusion NP memperkenalkan badan asing ke dalam bekalan darah, dengan itu mengantarkan tindak balas autoimun tempatan42. Reaksi autoimun boleh menyebabkan sejumlah besar faktor imun, dan apabila faktor -faktor ini terus terdedah kepada tisu, mereka boleh menyebabkan perubahan dalam isyarat43. Dalam kajian ini, overexpression IL-4, IL-17 dan IFN-γ adalah faktor imun yang tipikal, seterusnya membuktikan hubungan rapat antara NP dan MCS44. Model haiwan ini juga meniru kejayaan NP dan masuk ke dalam plat akhir. Proses ini selanjutnya mendedahkan kesan autoimun pada MC.
Seperti yang dijangkakan, model haiwan ini memberikan kita platform yang mungkin untuk mengkaji MC. Walau bagaimanapun, model ini masih mempunyai beberapa batasan: Pertama, semasa fasa pemerhatian haiwan, beberapa arnab peringkat pertengahan perlu dibasmi untuk ujian biologi histologi dan molekul, jadi sesetengah haiwan "tidak dapat digunakan" dari masa ke masa. Kedua, walaupun tiga titik masa ditetapkan dalam kajian ini, malang Lebih baik memerhatikan semua perubahan isyarat. Ketiga, perubahan dalam struktur tisu sememangnya dapat ditunjukkan dengan jelas oleh pewarnaan histologi, tetapi beberapa teknik khusus dapat mengungkapkan perubahan mikrostruktur dalam model ini. Sebagai contoh, mikroskopi cahaya terpolarisasi digunakan untuk menganalisis pembentukan fibrokartilage dalam cakera intervertebral arnab45. Kesan jangka panjang NP pada MC dan endplate memerlukan kajian lanjut.
Lima puluh empat lelaki Arnab putih New Zealand (berat kira-kira 2.5-3 kg, umur 3-3.5 bulan) secara rawak dibahagikan kepada kumpulan operasi palsu, kumpulan implantasi otot (kumpulan ME) dan kumpulan implan akar saraf (kumpulan NPE). Semua prosedur eksperimen telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Hospital Tianjin, dan kaedah eksperimen telah dijalankan dengan ketat mengikut garis panduan yang diluluskan.
Beberapa penambahbaikan telah dibuat kepada teknik pembedahan S. sobajima 46. Setiap arnab diletakkan dalam kedudukan recumbency lateral dan permukaan anterior lima cakera intervertebral lumbar berturut -turut (IVDs) terdedah menggunakan pendekatan retroperitoneal posterolateral. Setiap arnab diberikan anestesia umum (20% urethane, 5 ml/kg melalui urat telinga). Kotak kulit membujur dibuat dari pinggir bawah tulang rusuk ke pinggir pelvis, 2 cm ventral ke otot paravertebral. Tulang anterolateral kanan dari L1 hingga L6 didedahkan oleh pembedahan tajam dan tumpul tisu subkutaneus, tisu retroperitoneal, dan otot (Rajah 6A). Tahap cakera ditentukan dengan menggunakan pelvik sebagai mercu tanda anatomi untuk tahap cakera L5-L6. Gunakan jarum tusukan 16-gauge untuk menggerudi lubang berhampiran plat akhir vertebra L5 ke kedalaman 3 mm (Rajah 6B). Gunakan jarum suntikan 5-mL untuk aspirasi pulposus nukleus autologous dalam cakera intervertebral L1-L2 (Rajah 6C). Keluarkan nukleus pulposus atau otot mengikut keperluan setiap kumpulan. Selepas lubang gerudi semakin mendalam, jahitan yang boleh diserap diletakkan pada fascia yang mendalam, fascia dan kulit yang cetek, berhati -hati untuk tidak merosakkan tisu periosteal badan vertebra semasa pembedahan.
(A) Cakera L5 -L6 didedahkan melalui pendekatan retroperitoneal posterolateral. (B) Gunakan jarum 16-gauge untuk menggerudi lubang berhampiran endplate L5. (C) MF autologous dituai.
Anestesia umum ditadbir dengan urethane 20% (5 mL/kg) yang ditadbir melalui urat telinga, dan radiografi tulang belakang lumbar diulang pada 12, 16, dan 20 minggu selepas operasi.
Arnab dikorbankan oleh suntikan intramuskular ketamin (25.0 mg/kg) dan natrium pentobarbital intravena (1.2 g/kg) pada 12, 16 dan 20 minggu selepas pembedahan. Seluruh tulang belakang dikeluarkan untuk analisis histologi dan analisis sebenar dilakukan. Transkripsi terbalik kuantitatif (RT-qPCR) dan pembengkakan Barat digunakan untuk mengesan perubahan dalam faktor imun.
Peperiksaan MRI dilakukan dalam arnab menggunakan magnet klinikal 3.0 t (GE Medical Systems, Florence, SC) dilengkapi dengan penerima gegelung anggota ortogonal. Arnab telah dibius dengan urethane 20% (5 mL/kg) melalui urat telinga dan kemudian diletakkan di dalam magnet dengan rantau lumbar yang berpusat pada gegelung permukaan bulat diameter 5 inci (sistem perubatan GE). Imej localizer Coronal T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) diperolehi untuk menentukan lokasi cakera lumbar dari L3-L4 hingga L5-L6. Sagittal Plane T2-Weighted irisan telah diperoleh dengan tetapan berikut: urutan spin-echo cepat dengan masa pengulangan (TR) 2200 ms dan masa echo (TE) sebanyak 70 ms, matriks; bidang visual 260 dan lapan rangsangan; Ketebalan pemotongan adalah 2 mm, jurangnya adalah 0.2 mm.
Selepas gambar terakhir diambil dan arnab terakhir terbunuh, cakera yang samal, otot, dan NP dikeluarkan untuk pemeriksaan histologi. Tisu telah ditetapkan dalam formalin buffered neutral 10% selama 1 minggu, disuntik dengan asid ethylenediaminetetraacetic, dan parafin. Blok tisu tertanam di parafin dan dipotong ke bahagian sagittal (5 μm tebal) menggunakan microtome. Bahagian -bahagian telah diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H & E).
Selepas mengumpul cakera intervertebral dari arnab dalam setiap kumpulan, jumlah RNA diekstrak menggunakan lajur UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) mengikut arahan pengilang dan sistem transkripsi terbalik II (Promega Inc. , Madison, WI, Amerika Syarikat). Transkripsi terbalik dilakukan.
RT-QPCR dilakukan menggunakan Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., Amerika Syarikat) dan SYBR Green Jump Start TAQ Readymix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Syarikat) mengikut arahan pengeluar. Jumlah tindak balas PCR adalah 20 μL dan mengandungi 1.5 μl cDNA yang dicairkan dan 0.2 μm setiap primer. Primer direka oleh pereka oligoperfect (Invitrogen, Valencia, CA) dan dihasilkan oleh Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Jadual 1). Keadaan berbasikal termal berikut digunakan: langkah pengaktifan polimerase awal pada 94 ° C selama 2 minit, kemudian 40 kitaran 15 s setiap satu pada 94 ° C untuk denaturasi templat, penyepuhlindapan selama 1 minit pada 60 ° C, lanjutan, dan pendarfluor. Pengukuran dilakukan selama 1 minit pada 72 ° C. Semua sampel dikuatkan tiga kali dan nilai purata digunakan untuk analisis RT-qPCR. Data penguatan dianalisis menggunakan FlexStation 3 (Peranti Molekul, Sunnyvale, CA, Amerika Syarikat). Ekspresi gen IL-4, IL-17, dan IFN-γ telah dinormalisasi kepada kawalan endogen (ACTB). Tahap ekspresi relatif sasaran mRNA dikira menggunakan kaedah 2-ΔΔCT.
Jumlah protein diekstrak dari tisu menggunakan homogenizer tisu dalam penampan lisis RIPA (yang mengandungi koktel inhibitor protease dan fosfatase) dan kemudian disentrifugasi pada 13,000 rpm selama 20 minit pada 4 ° C untuk mengeluarkan serpihan tisu. Lima puluh mikrogram protein dimuatkan setiap lorong, dipisahkan oleh 10% SDS-PAGE, dan kemudian dipindahkan ke membran PVDF. Penyekatan dilakukan dalam 5% susu kering nonfat dalam saline buffered tris (TBS) yang mengandungi 0.1% tween 20 selama 1 jam pada suhu bilik. Membran diinkubasi dengan antibodi utama anti-decorin arnab (dicairkan 1: 200; Boster, Wuhan, China) (dicairkan 1: 200; Bioss, Beijing, China) semalaman pada suhu 4 ° C dan bertindak balas pada hari kedua; dengan antibodi sekunder (immunoglobulin g anti-arnab kambing pada 1: 40,000 pencairan) digabungkan dengan peroksidase lobak (Boster, Wuhan, China) selama 1 jam pada suhu bilik. Isyarat blot Barat dikesan oleh peningkatan chemiluminescence pada membran chemiluminescent selepas penyinaran sinar-X. Untuk analisis densitometrik, blots telah diimbas dan dikira menggunakan perisian bandscan dan hasilnya dinyatakan sebagai nisbah immunoreactivity gen sasaran untuk immunoreaktiviti tubulin.
Pengiraan statistik dilakukan menggunakan pakej perisian SPSS16.0 (SPSS, USA). Data yang dikumpulkan semasa kajian dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai (min ± SD) dan dianalisis dengan menggunakan analisis langkah berulang satu arah varians (ANOVA) untuk menentukan perbezaan antara kedua-dua kumpulan. P <0.05 dianggap signifikan secara statistik.
Oleh itu, penubuhan model haiwan MC dengan menanamkan NP autologous ke dalam badan vertebra dan melakukan pemerhatian makroanatomi, analisis MRI, penilaian histologi dan analisis biologi molekul mungkin menjadi alat penting untuk menilai dan memahami mekanisme MC manusia dan membangunkan terapeutik baru campur tangan.
Bagaimana untuk memetik artikel ini: Han, C. et al. Model haiwan perubahan modik telah ditubuhkan dengan menanamkan pulposus nukleus autologous ke dalam tulang subkondral tulang belakang lumbar. Sci. Rep 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., dan Boos, N. Pengimejan resonans magnetik tulang belakang lumbar: kelaziman cakera dan pengekalan cakera, pemampatan akar saraf, keabnormalan plat akhir, dan osteoarthritis bersama aspek dalam sukarelawan tanpa gejala . kadar. Radiologi 209, 661-666, doi: 10.1148/radiologi.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, dan LeBoeuf-Eed, K. Perubahan modik dan hubungan mereka dengan penemuan klinikal. Jurnal Spine Eropah: Penerbitan Rasmi Persatuan Spine Eropah, Persatuan Kecacatan Spinal Eropah, dan Persatuan Eropah untuk Penyelidikan Spine Cervical 15, 1312-1319, DOI: 10.1007/S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Perubahan modik dalam endplate vertebral lumbar: prevalensi dan persatuan dengan sakit belakang rendah dan sciatica pada pekerja lelaki pertengahan umur. Spine 32, 1116-1122, doi: 10.1097/01.BRS.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., dan Dalinka, M. MRI perubahan sumsum tulang berhampiran plat akhir dalam penyakit degeneratif tulang belakang lumbar. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531-534, doi: 10.2214/AJR.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, dan Carter, Jr Degenerative Disc Discease: Penilaian perubahan sumsum vertebra dengan MRI. Radiologi 166, 193-199, doi: 10.1148/radiologi.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, dan Carter, Jr Pencitraan penyakit cakera degeneratif. Radiologi 168, 177-186, doi: 10.1148/radiologi.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prediktor perubahan isyarat endplate neovertebral (modik) dalam populasi umum. Jurnal Spine Eropah: Penerbitan Rasmi Persatuan Spine Eropah, Persatuan Kecacatan Spinal Eropah, dan Persatuan Eropah untuk Penyelidikan Spine Cervical, Bahagian 19, 129-135, DOI: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB dan Mannisch, K. Perubahan modik selepas herniasi cakera lumbar. Jurnal Spine Eropah: Penerbitan Rasmi Persatuan Spine Eropah, Persatuan Kecacatan Spinal Eropah dan Persatuan Eropah untuk Penyelidikan Spine Cervical 16, 977-982, DOI: 10.1007/S00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., dan Kaapa, E. Perubahan jenis I Modic dapat meramalkan degenerasi cakera deformasi yang progresif: kajian prospektif 1 tahun. Jurnal Spine Eropah 21, 1135-1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ dan Fan, perubahan modik SW: kemungkinan penyebab dan sumbangan kepada degenerasi cakera lumbar. Hipotesis Perubatan 73, 930-932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, hv cakera dalaman pecah. Masalah prolaps cakera selama 50 tahun. Spine (Phila PA 1976) 11, 650-653 (1986).
Masa Post: Dec-13-2024